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讲座 9:真核转录终止第 1 部分:转录本的加帽和多腺苷酸化

RNA 出来后,5 端被加帽酶加帽以防止降解。 当加盖酶与CTD结合时,加盖酶的工作效率可提高10万倍。

第2部分:mRNA多腺苷酸化的步骤多腺苷酸化

多聚腺苷酸化因子识别 RNA 上的多聚腺苷酸信号序列,导致转录终止。

RNA 剪切由两个因子 CPSF 和 CstF 介导,它们识别 AAUAA 片段并将其切割。

POLYA 聚合酶将 AAAAAAAAAAAAAAA 添加到 mRNA 的第三端,以防止 mRNA 被降解。 多聚尾形成后天龙私服,多聚 A 结合蛋白与其结合。 一般来说,polyA尾的长度约为200个核苷酸。

第 3 部分:RNA Pol II 的发布

Rat1 降解聚合酶上剩余的 RNA。 聚合酶由此与DNA分离。

片段 4:染色质结构 染色质结构和转录调控 片段 5:RNA Pol II 如何通过染色质 RNA 聚合酶 II 进行转录

FACT蛋白可以促进染色质转录。 FACT 从核小体中去除 H2A/H2B 二聚体或异二聚体,留下组蛋白六聚体。 人们普遍认为这削弱了核小体和DNA之间的相互作用,使得聚合酶相对容易穿过核小体。 核小体可以被认为是一个臃肿的障碍。

SPT6 加上 FACT 可以将 H2A/H2B 二聚体重新组合在一起

第 6 段:RNA Pol II 转录的限速步骤 染色质结构的抑制作用阻止了 DNA 的开放:如果基因被 30 纳米纤维包裹天龙八部私服发布网,大多数转录因子就无法接触到这部分 DNA。 募集基本转录因子和RNA聚合酶形成开放复合物与TFIIH的活性有关。 启动子清除,与TFIIH的活性有关,RNA聚合酶II会在启动子附近暂停,需要招募PTEFb穿过这个初始暂停位点。 第 7 部分:Gal4 域交换实验

普塔什尼实验室的斯坦·菲尔兹(Stan Fields)表明,部分蛋白质也能发挥作用

第 10 讲:真核转录的 DNA 结合调节因子第 1 部分:序列特异性 DNA 结合转录因子序列特异性 DNA 结合转录因子

为了确定蛋白质的哪一部分起作用,将蛋白质按顺序切掉。 如果它们被切掉后不再与DNA结合,则意味着从N端开始的第四个蛋白质序列不再发挥作用; 从C端开始的第六个蛋白质序列不发挥作用; 蛋白质序列也不发挥作用,所以发挥作用的是底部部分。

如何确定与 DNA 结合的蛋白质的哪一部分负责?

第 2 部分:SELEX:识别 DNA 结合蛋白的靶序列

SELEX:用于确定未知识别序列的蛋白质结合位点

怀疑结合位点位于紫色区域,所以ATCG核苷酸随机分配在里面,然后用DNA双链来互补。孵育DNA和蛋白质天龙八部手游有没有sf,寻找与DNA结合的蛋白质,纯化(无论是凝胶还是凝胶)可以进行移位或免疫沉淀)天龙八部手游有没有sf,PCR 扩增,并重复这些步骤对与蛋白质结合的一对 DNA 进行测序。

SELEX步骤

读取测序结果如下。 该图显示了该序列发生的可能概率。 比如右边两个肯定是C,右数第三个可能是C或者A。

测序后结果

第 3 部分:DNA 结合蛋白中的转录激活结构域

我们找到了蛋白质的DNA结合域,但是如何找到蛋白质的激活域呢?

将异源DNA结合位点Gal4 DNA结合结构域融合到全长基因中,并用Gal4结合位点替换以下激活剂结合位点

删除蛋白质,看看它对转录激活有什么影响。 在这里我们观察βGal的活性。 如果发生激活,将会产生多个+。 图中黄色框为该蛋白的激活域。

第 4 部分:转录激活因子的靶标第 5 部分:抑制转录调节的示例

基本上,真核细胞中的转录通过激活机制发挥作用,但也存在抑制。 这里有一些例子。

片段6:基因沉默片段7:基因沉默实施例1

Polycomb家族的可能作用机制

第 8 部分:基因沉默的障碍

如何沉默基因

片段9:基因沉默实施例2

一种称为 HP1 的经典异染色质蛋白

本文由admin于2023-09-24发表在天龙八部sf_天龙八部发布网,如有疑问,请联系我们。

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